July 30, 2017

【摘要】：目的 本研究采用正常大鼠海马脑片灌流离子型γ-氨基丁酸受体（GABAA受体）拮抗剂荷包牡丹碱（bicuculline，Bic）引起癫痫样活动；以及应用脑立体定位技术在大鼠海马CA3中心区通过微量注射海人草酸（Kainic acid，KA）来建立颞叶癫痫（temporal lobe epilepsy，TLE）大鼠模型。采用离体脑片细胞外场电位记录方法观测不同浓度白藜芦醇（resveratrol, Res）对癫痫大鼠海马CA1区场电位的影响，为临床研发抗癫痫新药提供理论依据。 方法 1模型建立 1.1颞叶癫痫模型Wistar雄性大鼠，体重200～240克，清洁级。大鼠经水合氯醛（350mg/kg）腹腔麻醉后，固定于立体定位仪上，在右侧海马CA3中心区（AP:–4.0mm,ML:4.4mm, DV:3.8mm）用微量注射针注入2.5～3μl KA（0.4μg/μl），注射15min，留针10min，术后缝合头皮。大鼠急性发作等级参照Racine标准分级，达到Ⅳ级及以上视为建模成功，模型大鼠在手术后2～4周进行细胞外场电位记录。 1.2急性癫痫样活动正常大鼠离体海马脑片灌流GABAA受体拮抗剂Bic（30μmol/L）以引起癫痫样活动。 2离体脑片制备大鼠用2%戊巴比妥钠麻醉后迅速断头取脑，置于持续给予95%O2和5%CO2混合气的4℃人工脑脊液（artificial cerebrospinal fluid,ACSF）中。待脑组织冷却后沿海马槽纤维走向切成400μm厚的脑片，并将其移至含ACSF（30±2℃）的孵育槽中，持续通入混合气，孵育1～2h。 3场电位记录将孵育的脑片移至记录槽，持续灌流95%O2和5%CO2混合气饱和的ACSF，灌流速度2ml/min，温度32℃。刺激海马辐射层Schaffer侧支通路，在CA1区锥体细胞层记录群峰电位（population spike, PS）。 4统计学分析采用SPSS13.0统计软件分析。实验结果以x±SEM表示，组间均数用t检验进行比较，P 0.05具有统计学意义。 结果 1. Res对正常大鼠海马CA1区PS的影响电刺激离体海马脑片Schaffer侧支，在CA1区锥体细胞层通常可记录到单个PS，在灌流正常脑片的ACSF中分别加入低、中和高剂量的Res（分别为5μmol/L、15μmol/L和50μmol/L），当含有相应浓度Res的ACSF灌流脑片后，记录的PS幅度均无明显变化（n=8, P﹥0.05）。 2. Res对大鼠海马CA1区诱发癫痫样放电的影响大鼠海马CA1区癫痫样放电的形成可通过脑片急性灌流含Bic的ACSF或在体海马脑区注射KA诱发TLE。灌流含Bic（30μmol/L）的ACSF20min后，记录到的场电位为多个PS的痫样电位，再分别灌流添加低、中剂量Res（5、15μmol/L）的ACSF后，前4个PS幅度均无明显变化（分别为n=8, P﹥0.05；n=8, P﹥0.05）；灌流添加高剂量Res（50μmol/L）的ACSF后，前4个PS幅度均出现显著性降低，（n=8, P﹤0.01），并且PS数目也明显减少，为灌流前的82.02±1.3%（n=8, P﹤0.01）。在TLE模型大鼠海马脑片上记录到的场电位为多个PS的痫样电位，分别灌流含低、中剂量Res（5、15μmol/L）的ACSF后，前4个PS幅度均无明显变化（分别为n=6, P﹥0.05；n=6, P﹥0.05）；灌流含高剂量Res（50μmol/L）的ACSF后，前4个PS幅度均出现显著性降低（n=6, P﹤0.01），PS数目也明显减少，为灌流前的84.58±2.4%（n=6, P﹤0.01）。 结论 1.低、中、高剂量的Res (5μmol/L,15μmol/L和50μmol/L)对正常大鼠海马CA1区的PS没有明显的影响。 2.低、中剂量的Res (5μmol/L和15μmol/L)的对大鼠海马CA1区诱发的癫痫样放电活动没有明显的影响，而高剂量的Res (50μmol/L)对大鼠海马CA1区诱发的癫痫样放电活动有部分抑制作用。 详情请查阅：http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10366-1012468732.htm   1,837 total views, 1 views today

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摘　要： 应用细胞外记录单位放电技术,在大鼠海马脑片上观察了白藜芦醇(resveratrol)对海马CA1区神经元放电的影响.实验结果如下:(1)在52个CA1区神经元放电单位给予白藜芦醇(0.05、0.5、5 μmol/L)2 min,有46个放电单位(88.5%)放电频率明显降低,且呈剂量依赖性;(2)预先用0.2 mmol/L的L-glutamate灌流海马脑片,8个放电单位放电频率明显增加,表现为癫痫样放电,在此基础上灌流白藜芦醇(5μmol/L) 2 min,其癫痫样放电被抑制;(3)预先用L型钙通道开放剂Bay K8644灌流7个海马脑片,有6个单位(85.7%)放电增加,在此基础上灌流白藜芦醇(5 μmol/L)2 min,其放电被抑制;(4)9个放电单位灌流一氧化氮合酶抑制剂L-NAME(NG-nitro-L-arginine methyl ester)50 μmol/L,有7个单位(77.8%)放电明显增加,在此基础上灌流白藜芦醇(5 μmol/L)2 min ,放电被抑制;(5)10个放电单位灌流大电导钙激活性钾通道阻断剂TEA(tetraethylammonium chloride)1 mmol/L后,有9个单位(90%)放电增加,在此基础上灌流白藜芦醇(5 μmol/L)2min,8个放电单位(88.9%) 放电频率明显减低.以上结果提示:白藜芦醇能抑制海马神经元自发放电以及由L-glutamate、L-NAME、Bay K8644和TEA诱发的放电,可能与白藜芦醇抑制L型钙通道,减少钙内流有关;似乎与大电导钙激活性钾通道无关. 全文观看：点击原文查看 文章来 源 ：  http://www.cqvip.com/qk/90118x/200503/16011223.html   1,113 total views, 1 views today

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1997年法国波尔多大学中央医院的Dr.orgozo等对8777名65岁以上法国西南部纪龙德与多尔多涅居民，经3年对饮酒量和死亡率丶痴呆症丶早老性痴呆症危险性的关系进行了调查。这些区域高达95％的人只饮用葡萄酒(主要是红酒)，结果表明，经常适量饮用红酒的老年人相较於完全不饮酒者约可减少1／4罹患阿兹海默症及血管性失智症的风险，可能有人以为是酒精的功劳，然而降低上项罹病特质在其他酒精饮料中找不到，就表示另有其他非酒精因素影响健康，那就是红酒中的白藜芦醇成分得到後来众多的科学家研究证实，相对的饮酒过量反而是中风机率高危险群。 自此科学家对白藜芦醇做出许多对中枢神经系统疾病的研究，在脑缺血／再灌注损伤（I-R俗称脑中风）丶阿兹海默症(AD老人痴呆症)丶帕金森症(PD)丶癫痫(Epilepsy伊比力斯症)休克丶脊髓损伤丶耳聋等各有崭获。 2009年7月中国大陆西安交通大学李彤等於《第四军医大学学报》发表研究报告，认为很多中枢神经系统疾病的发病机制都涉及到谷氨酸兴奋毒性作用，其中癫痫及脑梗塞中，谷氨酸神经毒性作用被认为是发病中的关键环节，在神经系统，白藜芦醇主要表现为抑制凋亡进而保护神经元，李彤等的研究发现，在对抗谷氨酸神经毒性过程中，白藜芦醇的作用表现为抑制凋亡促进蛋白Bax表达，保护细胞而提高存活率，白藜芦醇的作用表现好像是一刀两刃，在突变的癌细胞，其功能为促进凋亡，在正常细胞组织，其功能是抑制凋亡，其凋亡调节作用无论正向还是负向都与Bc1家族成员相关。白藜芦醇可以通过调节Bax的表达对抗谷氨酸兴奋毒性而保护神经元。 2010年中国大陆第四军医大学西京医院高大宽等人在《实用医学杂志》发表“白藜芦醇对暂时性氧糖剥夺致币申经元损伤的保护用”实验研究，说明神经组织主要有两种细胞构成，即神经胶质细胞和神经元，体内发生脑缺血再灌注损伤时，这两种细胞均不同程度受到损伤，而导致币申经功能障碍。结论提出白藜芦醇可抑制神经元mmp-9的表达，从而发挥其对暂时性氧糖剥夺致示申经元损伤的保护作用。   1,626 total views, no views today

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